La hibridación in situ es un método para detectar aberraciones cromosómicas. Implica etiquetado específico cromosomas con harina tintes y uniéndolos a una sonda de ADN. Esta técnica se utiliza para el diagnóstico prenatal de mutaciones genéticas.
¿Qué es la hibridación in situ?
La hibridación in situ implica el etiquetado específico cromosomas con harina tintes y uniéndolos a una sonda de ADN. Esta técnica se utiliza para el diagnóstico prenatal de gen mutaciones. Hibridación in situ o hibridación in situ fluorescente implica la detección genética molecular de ácidos nucleicos a partir de ARN o ADN en tejidos específicos o una célula. Normalmente, este tipo de diagnóstico se utiliza para detectar una anomalía cromosómica estructural o numérica en el embarazo. Para ello, se utiliza una sonda producida artificialmente, que a su vez consiste en ácido nucleico. Luego se une al ácidos nucleicos en el organismo por apareamiento de bases. Esta unión se denomina hibridación. La detección se realiza sobre la estructura viva del paciente y, por tanto, corresponde a la detección in situ. Se distinguen de esto los métodos in vitro, en los que la detección tiene lugar en el tubo de ensayo. El método fue desarrollado en el siglo XX por los científicos Joe Gall y Mary Lou Pardue. La técnica ha evolucionado desde entonces. Por ejemplo, mientras que entonces se utilizaron sondas radiactivas, las sondas marcadas con fluorocidad con un enlace covalente al marcaje moléculas se utilizan hoy.
Función, efecto y objetivos
La hibridación in situ se usa generalmente para detectar aberraciones cromosómicas, anomalías cromosómicas que no se pueden detectar en un cariograma. Por lo tanto, el método se utiliza siempre cuando se deben determinar enfermedades hereditarias durante el embarazo. Dado que las aberraciones cromosómicas son un problema que no debe subestimarse en la actualidad, la aplicación del método ha aumentado con el tiempo. La hibridación se realiza utilizando células nativas de la madre. líquido amniótico. La base de la técnica es la unión de la sonda marcada con color a los fragmentos de ADN. Gracias a la unión, se puede utilizar un microscopio para evaluar el número de copias, ya que las copias individuales emiten una señal de luz y, por lo tanto, se pueden hacer visibles bajo el microscopio. Existen diferentes procedimientos para esto. O el análisis tiene lugar inmediatamente después de la unión. En este caso, un tinte de floración como biotina se utiliza, que se une directamente a la sonda de ADN. En el método indirecto de hibridación in situ, el análisis no se puede realizar inmediatamente después de la hibridación porque las sustancias fluorescentes pueden unirse a la sonda solo después de la hibridación. Este método indirecto se usa más comúnmente que el método directo porque se considera más sensible. Las técnicas incluyen sondas de ADN centrométricas específicas de cromosomas, sondas de ADN específicas de locus, sondas de bibliotecas de ADN específicas de cromosomas e hibridaciones genómicas comparativas. Se pueden utilizar sondas de ADN de centrómero específicas de cromosomas para detectar anomalías numéricas cromosómicas. Es decir, se utilizan principalmente cuando se duplican o eliminan. cromosomas son sospechosos. Las sondas de ADN específicas de locus son principalmente adecuadas para la detección de mutaciones mínimas que no se pueden detectar en el cariograma. En particular, se utiliza una sonda de biblioteca de ADN específica de cromosomas para detectar inserciones y translocaciones. La hibridación comparativa del genoma, por otro lado, es un análisis completo de pérdidas y ganancias en material cromosómico. Hoy en día, la hibridación in situ es de gran importancia dentro del diagnóstico de diversas mutaciones cromosómicas. En el diagnóstico de El síndrome de Downpor ejemplo, las sondas se unen al cromosoma 21. Para ello se suelen utilizar sondas cromosómicas específicas, que pueden aplicarse en caso de sospecha de esta enfermedad. Puede surgir una sospecha, por ejemplo, si los padres han dado a luz previamente a un niño con la enfermedad y el ultrasonido la imagen es llamativa. Si hay un empate triple en lugar de doble, lo que resulta en una señal de color triple, el diagnóstico se considera confirmado.
Riesgos, efectos secundarios y peligros
A diferencia de la PCR, por ejemplo, la hibridación in situ es mucho menos susceptible a la contaminación. Además, el tiempo requerido para el procedimiento es inmensamente menor; sin embargo, debido a que los embriones en particular forman patrones cromosómicos, cualquier patrón presente no puede usarse para inferir con certeza el resto del cromosoma. y por tanto el estado genético de otras células. Las señales de color también pueden superponerse o permanecer invisibles por otras razones. Por tanto, la hibridación in situ como herramienta de diagnóstico durante el embarazo es relativamente propenso a errores. Pueden ocurrir diagnósticos erróneos y los padres pueden decidir no tomar una embrión. Para reducir la propensión a errores de la hibridación in situ, deben examinarse simultáneamente al menos dos células embrionarias. Al examinar dos células en paralelo, ahora solo existe un riesgo insignificante de diagnóstico erróneo. Por lo tanto, los padres pueden confiar en el diagnóstico en tal caso. La hibridación in situ no se ofrece a todas las mujeres embarazadas, sino solo a las mujeres de un grupo de riesgo. Sin embargo, a las mujeres embarazadas no se les niega este tipo de diagnóstico a petición propia. Anormal ultrasonido Los hallazgos o un suero anormal pueden hacer que un médico ofrezca el procedimiento de diagnóstico. Hoy en día, la hibridación in situ se puede utilizar para diagnosticar una gran proporción de aberraciones cromosómicas, pero no todas. Por lo tanto, la hibridación in situ nunca debe realizarse sola, sino que siempre debe usarse junto con una prueba cromosómica convencional. El cuidado de la mujer embarazada juega un papel importante en este procedimiento. Por lo tanto, antes del análisis, se realiza una discusión exhaustiva sobre el método de diagnóstico con la futura madre, informándole sobre los riesgos, las posibilidades y las limitaciones de la técnica.
